产品货号：
BTN15-14800
中文名称：
弧菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Vibrio spp. qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测弧菌的通用试剂盒。
弧菌(Vibrio spp.)是菌体短小，弯曲成弧形，尾部带一鞭毛的革兰氏阴性菌。弧菌属广泛分布于河口、海湾、近岸海域的海水和海洋动物体内。该菌引起的食物中毒经烹饪不当的海产品或盐腌制品所传播。常见的为海蛰、海鱼、海虾及各种贝类，因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后，也可发生食物中毒。该菌常年均可发生，可从自限性腹泻至中度霍乱样病症，有腹痛、腹泻、呕吐和低热，粪便多为水样，少数为血水样，恢复较快，病后免疫力不强，可重复感染，该菌还可引起浅表创伤感染、败血症等，给人体健康带来严重损害，因此弧菌检测具有重要的意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：弧菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Vibrio spp. qPCR Kit(Probe Method)
弧菌(Vibrio spp.)是菌体短小，弯曲成弧形，尾部带一鞭毛的革兰氏阴性菌。弧菌属广泛分布于河口、海湾、近岸海域的海水和海洋动物体内。该菌引起的食物中毒经烹饪不当的海产品或盐腌制品所传播。常见的为海蛰、海鱼、海虾及各种贝类，因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后，也可发生食物中毒。该菌常年均可发生，可从自限性腹泻至中度霍乱样病症，有腹痛、腹泻、呕吐和低热，粪便多为水样，少数为血水样，恢复较快，病后免疫力不强，可重复感染，该菌还可引起浅表创伤感染、败血症等，给人体健康带来严重损害，因此弧菌检测具有重要的意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据人弧菌高度保守区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 弧菌通用探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 弧菌通用qPCR探针15-14800pro | 50μL |
| 弧菌通用PCR阳性对照2.0 (1×108拷贝/μL) 60908-14800pc | 50μL |
| 核酸释放剂试用装61202 | 20次(1mL，绿盖) |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNA提取试剂盒或柱式细菌DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号：BTN61202
下载。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。
下面只以定量分析为例描述操作步骤。 - 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 弧菌通用qPCR探针 1μL 1μL 各1μL 弧菌通用探针法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL N+2个待测DNA模板 7μL - - 超纯水 - 7μL - 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) - - 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 94℃ 5min PCR反应
(40个循环)94℃ 30sec 55℃ 30sec(采集FAM通道的荧光信号) 72℃ 30sec 最后延伸 72℃ 10min
四、数据处理
- 以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
六、电泳检测 - 如果有必要电泳确认，可取10～20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400bp。但电泳非常容易污染实验环境，建议不轻易采纳。
相关搜索：弧菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Vibrio spp. qPCR Kit(Probe Method)